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 　梅毒螺旋體抗體檢測(cè)作為輸血安全的必測(cè)指標(biāo)，其試驗(yàn)方法與試劑的選擇尤為重要，ELISA法篩檢梅毒抗體是目前普遍采用的方法，有關(guān)梅毒抗體ELISA試劑盒的評(píng)價(jià)報(bào)道較多，但多為靈敏度或特異度等少數(shù)評(píng)價(jià)指標(biāo) ［1，2］ 為了全面客觀地評(píng)價(jià)ELISA方法對(duì)無償獻(xiàn)血者梅毒抗體的篩檢價(jià)值，ELISA試劑盒篩檢的真實(shí)性和可靠性，筆者對(duì)我們常用的兩種篩檢試劑盒的檢測(cè)真實(shí)性、可靠性及Cut-off值的合理性進(jìn)行評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法
1.1 材料 梅毒抗體血清盤血清40份（購(gòu)自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心，批號(hào):200103，其中陽性22份，陰性18份），另外隨機(jī)抽取西安市有代表性的無償獻(xiàn)血者梅毒抗體陰性血清100人份。梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒分別由上海伊麗薩生物科技有限公司（以下稱ELISA1）和美國(guó)諾泰公司（以下稱ELISA2）提供。

1.2 方法
1.2.1 抽樣方法
將2003年1～5月西安市某血液中心無償獻(xiàn)血者梅毒抗體陰性血清標(biāo)本按順序、年齡、職業(yè)、文化程度分層，再按隨機(jī)表中隨機(jī)數(shù)字抽樣，分層特征比例按該血液中心前3年無償獻(xiàn)血者以上分層特征構(gòu)成比例進(jìn)行，抽滿100例為止。
1.2.2 盲法篩檢
由評(píng)價(jià)監(jiān)督者對(duì)考核血清盤重新編密碼，由2名操作熟練的專業(yè)檢驗(yàn)人員對(duì)編碼血清盤用上述2種試劑盒進(jìn)行盲法檢測(cè)，操作嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行，篩檢結(jié)果由全自動(dòng)酶標(biāo)儀自動(dòng)打印OD值及陰、陽性結(jié)果。為考核試劑盒的可靠性，由2名以上專業(yè)檢驗(yàn)人員在條件*相同的情況下，對(duì)考核血清盤40份血清進(jìn)行第二次盲法篩檢，第二次篩檢前重新編密碼，結(jié)果判讀后再打開密碼，核對(duì)結(jié)果。
1.2.3 金標(biāo)準(zhǔn)的確定
衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心梅毒抗體血清盤已知陽性與陰性為金標(biāo)準(zhǔn)。
1.2.4 其實(shí)性評(píng)價(jià)
將40份血清盤標(biāo)本分為梅毒抗體陽性與陰性組，再將篩檢試劑盒的篩檢結(jié)果分為梅毒抗體陽性與陰性組，分組數(shù)據(jù)匯入篩檢與診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)四格表，用分式 ［3］ 分別計(jì)算出真實(shí)性評(píng)價(jià)的8個(gè)指標(biāo)，即靈敏度、特異度、假陽性率、假陰性率、陽性預(yù)告值、陰性預(yù)告值、準(zhǔn)確度及約登指數(shù)。
1.2.5 可靠性評(píng)價(jià)
將40份血清盤樣本*次與第二次篩檢結(jié)果，分別匯入四格表，分別計(jì)算出各試劑盒重復(fù)試驗(yàn)的符合率與卡帕值，卡帕值的判定標(biāo)準(zhǔn)按Fleiss提出的3級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)，即0.75～1.00為符合很好，0.4～0.74為一般符合，0.01～0.39為缺乏符合 ［3］ 。
1.2.6 Cut-off值評(píng)價(jià)方法
為了評(píng)價(jià)兩種試劑盒截?cái)帱c(diǎn)或臨界值的合理性，將考核血清盤中18份陰性血清及隨機(jī)抽取的西安市無償獻(xiàn)血者梅毒抗體陰性血清100人份測(cè)量出的OD值編制頻數(shù)分布表，按篩檢試驗(yàn)正常值范圍確定方法 ［4］ ，分別用統(tǒng)計(jì)學(xué)界限的正態(tài)分布法及百分位數(shù)法計(jì)算出每種試劑盒的Cut-off值，并與按試劑盒說明書規(guī)定計(jì)算出的Cut-off值比較，結(jié)合陰性、陽性O(shè)D值頻數(shù)分布特點(diǎn)，分析評(píng)價(jià)其合理性。

2 結(jié)果
2.1 對(duì)考核血清篩檢結(jié)果 在已知22份陽性中，ELISA1篩檢出21份，ELISA2篩檢出22份，在已知18份陰性標(biāo)本中，ELISA1與ELISA2均檢出17份。
2.2 真實(shí)性評(píng)價(jià) 利用兩種試劑盒的篩檢結(jié)果，計(jì)算出評(píng)價(jià)真實(shí)性的8個(gè)指標(biāo)。
2.3 可靠性評(píng)價(jià) ELISA1與ELISA2兩次重復(fù)檢出的陽性份數(shù)相同，重復(fù)試驗(yàn)的符合率均為100%，卡帕值均為1.00。
2.4 Cut-off值的評(píng)價(jià)
依據(jù)ELISA1與ELISA2試劑盒對(duì)考核血清盤18份陰性血清及100份西安市無償獻(xiàn)血者梅 毒抗體陰性血清測(cè)量的OD值，用統(tǒng)計(jì)學(xué)界限的正態(tài)分布法與百分位數(shù)法分別計(jì)算其Cut-off值，按兩種ELISA試劑盒說明書規(guī)定方法分別計(jì)算出zui低Cut-off值，并將3種Cut-off值進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，按規(guī)范的正態(tài)分布法與百分位數(shù)法計(jì)算出的Cut-off值均遠(yuǎn)低于試劑盒說明書規(guī)定的Cut-offzui小值，但結(jié)合140份無償獻(xiàn)血者陽性與陰性O(shè)D值實(shí)際頻率分布特點(diǎn)分析，試劑盒規(guī)定的截?cái)帱c(diǎn)是合理的，如果按統(tǒng)計(jì)界限計(jì)算的Cut-off值判讀，并不能提高試劑盒的靈敏度，反而會(huì)使假陽性率升高。

ELISA1及ELISA2的靈敏度分別為95.5%，100.0%，特異度分別為94.4%，94.4%，約登指數(shù)分別為0.90，0.94，兩種試劑的重復(fù)符合率均為100.0%，兩種試劑的Cut-off值是合理的。

3 討論
評(píng)價(jià)某項(xiàng)篩檢試驗(yàn)需要有一個(gè)*的客觀性強(qiáng)的金標(biāo)準(zhǔn)，衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的梅毒抗體考核血清盤樣本來自獻(xiàn)血人群，陰、陽性界限清楚，含有梅毒抗體多種效價(jià)的血清，客觀性強(qiáng)，是*的金標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于篩檢試驗(yàn)的評(píng)價(jià)不僅要評(píng)價(jià)靈敏度、特異度，還需評(píng)價(jià)約登指數(shù)等多項(xiàng)綜合性指標(biāo)及可靠性指標(biāo)，而且還需要對(duì)試劑盒陰性與陽性的截?cái)帱c(diǎn)（Cut-off值）的合理性進(jìn)行評(píng)價(jià)。