我們在使用酶聯免疫試劑盒96孔板的實驗測定的時候，常發現有“邊緣效應"，也就是外周孔顯色較中心孔深。經研究證實在溫育中的熱力學梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在實驗室的常規ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應"，并且可提高測定的重復性。
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4． 試劑應按標簽說明書儲存，酶聯免疫試劑盒使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
5． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里。
9． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
10． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
11． 加入試劑的順序應一致，酶聯免疫試劑盒以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
12． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
