更新時間：2022/1/18
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人 （Human） 羥脯氨酸 （HYP） ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本：血清或血漿
試驗原理：
HYP試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知HYP濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將HYP和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中HYP的濃度呈比例關系。
試劑盒內容及其配制
| 試劑盒成份（2-8℃保存） | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
| 96/48人份酶標板 | 1塊板（96T） | 半塊板（48T） | 即用型 |
| 塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
| 標準品：80nmol/L | 1瓶（0.6ml） | 1瓶（0.3ml） | 按說明書進行稀稀 |
| 空白對照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） | 即用型 |
| 標準品稀釋緩沖液 | 1瓶（5ml） | 1瓶（2.5ml） | 即用型 |
| 生物素標記的抗HYP抗體 | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 親和鏈酶素-HRP | 1瓶（10ml） | 1瓶（5.0ml） | 即用型 |
| 洗滌緩沖液 | 1瓶（20ml） | 1瓶（10ml） | 按說明書進行稀釋 |
| 底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 終止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 標本稀釋液 | 1瓶（12ml） | 1瓶（6.0ml） | 即用型 |
自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
1． 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
| 80 nmol/L | （6號標準品） | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
| 40 nmol/L | （5號標準品） | 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 20 nmol/L | （4號標準品） | 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 10 nmol/L | （3號標準品） | 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 5.0 nmol/L | （2號標準品） | 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 2.5 nmol/L | （1號標準品） | 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 0 nmol/L | （空白對照） | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
建議使用的實驗方案
| | 標準品濃度（nmol/L） | | ||||||||||
| A | 80 | 80 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| B | 40 | 40 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| C | 20 | 20 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| D | 10 | 10 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| E | 5.0 | 5.0 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| F | 2.5 | 2.5 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| G | 0 | 0 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| H | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到精確的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。
結果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的HYP標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的HYP含量可根據其OD值由標準曲線換算出濃度。
3、檢測值范圍：0-80nmol/L
4、敏感度： 0.1 nmol/L
GS-E11328 人蛋白聚糖（PG）ELISA試劑盒 Human Proteoglycan,PG ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11329 人吡啶酚（PYD）ELISA試劑盒 Human Pyridinoline,PYD ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11330 人5羥基吲哚乙酸（5-HIAA）ELISA試劑盒 Human 5-hydroxyindolacetic acid,5-HIAA ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11331 人12羥二十烷四烯酸（12-HETE）ELISA試劑盒 Human 20-hydroxyeicosatetraenoic acid,12-HETE ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11332 人羥脯氨酸（Hyp）ELISA試劑盒 Human hydroxyproline,Hyp ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11333 人一氧化氮（NO）ELISA試劑盒 Human nitric oxide,NO ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11334 人上皮中性粒細胞活化肽78（ENA-78/CXCL5）ELISA試劑盒 Human Epithelial neutrophil activating peptide 78,ENA-78 ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11335 人維生素C（VC）ELISA試劑盒 Human Vitamin C,VC ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11336 人維生素B6（VB6）ELISA試劑盒 Human Vitamin B6,VB6 ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11337 人可溶性P選擇素（sP-selectin）ELISA試劑盒 Human soluble P-selectin,sP-selectin ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11338 人基質金屬蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）ELISA試劑盒 Human tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1 ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11339 人維生素D（VD）ELISA試劑盒 Human Vitamin D,VD ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11340 人維生素K1（VK1）ELISA試劑盒 Human Vitamin K1,VK1 ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11341 人維生素B12（VB12）ELISA試劑盒 Human Vitamin B12,VB12 ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11342 人維生素D3（VD3）ELISA試劑盒 Human Vitamin D3,VD3 ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11343 人維生素D2（VD2）ELISA試劑盒 Human Vitamin D2,VD2 ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11344 人維生素E（VE）ELISA試劑盒 Human Vitamin E,VE EELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11345 人維生素A（VA）ELISA試劑盒 Human Vitamin A,VA ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11346 人鳥苷酸交換因子（GEF）ELISA試劑盒 Human Guanine Exchange Factor,GEF ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11347 人維生素D受體（VD R）ELISA試劑盒 Human Vitamin D Receptor,VD R ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11348 人毒性休克綜合征毒素1（TSST-1）ELISA試劑盒 Human toxic shock syndrome toxin,TSST-1 ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11349 人金葡菌腸毒素（SE）ELISA試劑盒 Human staphylococcus aureus enterotoxins,SE ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11350 人鈣聯蛋白（CNX）ELISA試劑盒 Human calnexin,CNX ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11351 人繆勒管抑制物質/抗繆勒管激素（MIS/AMH）ELISA試劑盒 Human Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian hormone,MIS/AMH ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11352 人β細胞素（BTC） ELISA試劑盒 Human beta cellulin,BTC ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11353 人胎球蛋白A（FETU-A）ELISA試劑盒 Human Fetuin A,FETU-A ELISA試劑盒 96T/48T
GS-E11354 人胎盤核糖核酸抑止劑（HPRI）ELISA試劑盒 Human placental ribonuclease inhibitor,HPRI ELISA試劑盒 96T/48T
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